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                  免疫复合物(Immune Complexes,IC)的检测(3)

                  作者:中华医学网发布时间:2017-10-12 17:35浏览:

                  四)细胞技术测定

                  有些细胞表面具有Fc受体和(或)补体受体,可与免疫复合物相应成分特异性结合,因而可用来对免疫复合物进行检测。

                  1、Raji细胞试验 Raji细胞是从Burkin淋巴瘤患者分离的一种B细胞株,表面有大量C1q、C3b和C3d受体,但无表面免疫球蛋白;因此Raji细胞能与带有补体的免疫复合物结合。先在塑料管中加处一定量的Raji,再加入待检血清,充分作用后离心洗涤;最后加入荧光素标记的抗人IgG,洗涤后细胞表面显现荧光为试验阳性;但荧光法只能做定性检测。或加入同位素标记的抗人IgG,离心洗涤后检测沉淀细胞的放射活性;以热聚合IgG作参考标准,可绘制出CIC含量与放射活性的标准曲线,从而求得待测标本中CIC的含量。 Raji细胞法敏感性高、特异性强、方法简单、不受DNA与内毒素的影响;但Raji细胞表面还有Fc受体,因此被检血清中的游离IgG通过Fc段与 Raji细胞结合,造成假阳性。在待检标本中有抗淋巴细胞抗体时也可导致假阳性。再则,维持Raji细胞的培养较困难,培养条件的变化可改变Raji细胞表面受体的数目及亲和性,影响检测敏感性。

                  2、人红细胞法 人红细胞表面具有C3b受体,可与带有补体成分的CIC相结合。将待检血清与4%的人O型红细胞悬液等量混合,37℃温育后离心洗涤;加入同位素标记的抗人IgG抗体,再温育洗涤后测定红细胞的放射活性;以热聚合IgG作参考标准计算出标本中CIC含量。但该法只能检测已结合补体的CIC。

                  其他细胞法如血小板凝集试验、玫瑰花环形成抑制试验、ADCC抑制试验、巨噬细胞吞噬抑制试验和中性粒细胞游走抑制试验等,也都可用来检测CIC,方法的敏感性也都很高,但这些方法的影响因素多,可重复性差,所以实际中工作并不多用。

                  (五)免疫复合物的成分检测

                  免疫复合物中抗原和抗体的性质及各类的检测对临床诊治疾病及深入研究疾病的免疫病理机制有一定价值。但是由于所涉及的抗原种类很多,例如病原微生物、自身物质、各类同种抗原等,检测方法可分别参见各种抗原的检测技术。免疫复合物中的抗体主要涉及IgG及其亚类、IgM和IgA;方法是将血清中免疫复合物分离出来,再用双抗体ELISA夹心法等方法分析抗体的类别。

                  循环免疫复合物的理想检测方法应具备以下特点:①敏感性高,②特异性强,可重复性好,④操作简便,⑤适用面广。目前检测免疫复合物的方法虽发展到几十种,但还没有一种方法具备上述所有的特点,综合相比之下,C1q结合试验、胶固素结合试验、Raji细胞试验和RF抑制试验等方法比较好些。如果方法得当、试剂合格、标本新鲜、操作小心、分析谨慎、CIC测定就会有较大的参考价值。

                  二、组织固定免疫复合物的检测

                  确定免疫复合物病的直接证据不是检出CIC,而是在病变部位查到固定的IC沉积。在一些自身免疫病和免疫复合物病,例如系统性红斑狼疮、部分肾小球肾炎、类风湿性关节炎、结节性多动脉炎和寻常型天疱疮等,组织沉积免疫复合物的检出对疾病的诊断和发病机制的研究都比CIC的检出更有意义。

                  检测组织沉淀免疫复合物常用免疫组织化学技术,首先从适当的病理部位采取组织标本做冰冻切片,用荧光标记物的抗人IgG或抗人C3染色,在荧光显微镜下见到相应部位显示荧光为阳性反应、;也可用酶标抗人IgG或抗人C3与标本切片反应,再用酶的底物溶液显色,用普通生物显微镜即可观察到相应部位被染色。

                  三、免疫复合物检测的意义及应用

                  判定免疫复合物为发病机制的证据有三:①病变局部有IC沉积;②CIC水平显著升高;③明确IC中的抗原性质。第三条证据有时很难查到,但至少要具备前两条,单独CIC的测定不足为凭。人体在健康状态下也存在少量的CIC(大约10~20μg/ml),其生理与病理的界限不易区分。另外,CIC检测的方法太多,其原理各不相同,用一种方法测定为阳性,另一种方法检测可能为阴性;但与免疫组化法一起检测,其意义就大得多。

                  目前已经明确系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、部分肾小球肾炎和血管炎等疾病为免疫复合物病,CIC检测对这些疾病仍是一种辅助诊断指标,对判断疾病活动和治疗效果也有一定意义。在发现紫癜、关节痛、蛋白尿、血管炎和浆膜炎等情况时,可考虑免疫复合物病的可能性,进行CIC和组织沉积IC的检测。另外,患有恶性肿瘤时CIC检出率也增高,但不出现Ⅲ型变态反应的损伤症状,称之为临床隐匿的IC病,然而这种状态常与肿瘤的病情和预后相关