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                      免疫复合物(Immune Complexes,IC)的检测(2)

                      作者:中华医学网发布时间:2017-10-12 17:34浏览:

                      2、冷球蛋白测定 在某些病理情况下,血清中的免疫复合物具有可逆性冷沉淀的特性,于4℃冰箱中放置1~3天可自发地沉淀下来;此种情况多见于冷球蛋白血症,所涉及的抗原包括自身的IgG、IgM、核苷酸、肿瘤相关抗原、肾小管上皮、甲状腺球蛋白、红细胞基质等,还有外源性抗原如乙肝病毒、EB病毒、巨细胞病毒、牛白蛋白和马蛋白等。

                      (二)补体相关测定法 IgG和IgM类抗体与抗原结合后,重链CH2区的补体结合点暴露,可以固定C1q并激活补体的系列反应,这是利用补体有关技术检测免疫复合物的基础。

                      1、C1q结合试验 将待检血清先行加热56℃30min,以灭活其中的补体和破坏已与CIC结合的C1q,空出补体结合点。CIC与C1q的结合可用多种方法进行检测,常用的有以下3种。

                      (1)液相法 先将同位素标记的C1q与灭活过的血清标本混合作用,再加入0.5%(终浓度)的PEG将结合了C1q的CIC沉淀下来,通过检测沉淀物中的放射活性来计算CIC的含量。

                      (2)固相法 先将C1q吸附于固相载体表面,加入待检血清使CIC与C1q结合,再加入同位标记的或酶标记的抗人IgG或SPA,最后检测其放射活性或酶活性。

                      (3)C1q偏离试验 先将同位素标记的C1q与灭活的血清标本混合,再加抗体致敏的绵羊红细胞,温育后离心,检测红细胞上的放射活性。红细胞的放射活性与免疫复合物的量呈负相关。

                      2、补体试验 本法的原理类似补体结合试验。将一定量的补体(多为混合豚鼠血清)与灭活的待检血清混合温育,反应后加入致敏绵羊红细胞。如出现溶血表示血清中没有CIC 存在;不溶血说明标本中有CIC存在。将血清标本做不同稀释,并与已知的热聚合IgG作对照,可以计算出CIC的含量。本方法的灵敏度较高,且易于在一般实验室开展,不足之处是特异性较差。

                      3、胶固素结合试验 胶固素(conglutinin)是牛血清中的一种正常蛋白,能与C3d特异性结合;体内与补体结合的CIC都带有C3d,因此胶固素可与CIC结合。用一定量的胶固素包被塑料管,往管中加入稀释的血清标本,温育后再加入同位素标记或酶标记的抗人IgG抗体,最后检测各管的放射活性或酶活性,计算CIC的含量。胶固素性质稳定、容易保存、来源方便、价格便宜,检测方法也不复杂,便于推广。本法的不足是只能检出已结合补体的CIC,但不论何种激活途径都一样检出,并可用作CIC分离。

                      (三)抗球蛋白测定法

                      类风湿因子(RF)为抗IgG的自身抗体,与变性IgG、热聚合IgG和IC都有较强的亲和力。单克隆RF(mRF)可从待发性冷球蛋白血症的血清中提取,多克隆RF(pRF)可从类风湿性关节炎的血清中提取。用mRF比pRF的敏感性更高一些。

                      1、mRF固相抑制试验 将mRF吸附于固相载体上,随后加入血清标本,再加入同位素标记的可溶性热聚合IgG。如果标本中含有IC,固相mRF已与IC结合,热聚合IgG与 mRF的结合使被抑制,所以固相中的放射活性与CIC的含量呈负相关。也可用同位素标记的mRF先与血清标本反应,再加入热聚合IgG附着的琼脂糖珠,温育并离心洗涤后测量沉淀物的放射强度,测定值与CIC的含量呈负相关。此法的敏感性比前法更高一些。

                      2、pRF胶乳凝集抑制试验 将pRF与血清标本混合,再加入IgG致敏的胶乳悬液。如果标本中有CIC存在,则pRF先与之结合,凝集反应呈阴性。

                      3、抗抗体法 抗抗体可存在于极个别的健康人血清中,是一种抗IgG F(ab')2的IgM类抗体,能与已结合抗原的IgG反应,但不与游离的IgG或热聚合IgG反应,因而特异性较高。先将抗抗体与待检血清混合,再加入 IgG致敏的人O型Rh+红细胞;如标本中有CIC存在,抗抗体被中和,致敏红细胞不出现凝集。

                      以上各种抗球蛋白试验以mRF法敏感性最高,但是mRF较难寻找。这类方法易受内源性RF的干扰,最好先行检查并除去标本中的内源性RF后再行试验。若遇标本中有聚合Ig,RF法也易出现假阴性;改用抗抗体法可避免这种现象,但是抗抗体的来源困难